Pan-enterovirusvasta-aineiden testaaminen immunofluoresenssimenetelmällä
German, Irina (2015)
German, Irina
Turun ammattikorkeakoulu
2015
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201503133137
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201503133137
Tiivistelmä
Opinnäytetyössä tutkittiin kaupallisten enterovirusvasta-aineiden toimivuutta ja kykyä tunnistaa tietty pikornavirustyyppi soluviljelmissä immunofluoresenssimenetelmällä (IF-menetelmä). Koska pikornavirukset ovat sekvensseiltään ja siten myös pintarakenteiltaan erilaisia, tiettyä virusta vastaan tuotetut vasta-aineet eivät välttämättä tunnista muita virustyyppejä. Tällöin vasta-aineisiin perustuvan laaja-alaisesti tunnistavan ns. antigeeninosoitustestin kehittäminen on haastavaa. Työssä käytettiin ns. pan-enterovirusvasta-aineita, joiden pitäisi tunnistaa eri pikornavirustyyppejä eli ne eivät ole spesifisiä yhdelle virustyypille.
Pikornavirukset (mm. entero- ja parechovirukset) ovat hyvin pieniä vaipattomia RNA-viruksia. Nämä virukset ovat yleisimpiä ihmisen taudinaiheuttajia. Turun Virusopin viruskokoelmista on valikoitu n. 50 pikornavirustyyppikantaa käsittäen entero- ja parechoviruksia, jotka infektoitiin valikoituihin solulinjoihin. Virusinfektiota seurattiin sytopaattisen vaikutuksen perusteella valomikroskoopilla. Infektoituvuuden perusteella sopivimmat virukset valittiin lisäykseen ja vasta-ainekokeisiin. Työssä testattiin useita kirjallisuudessa mainittuja solulinjoja kuten RD, A549, B-vero, HT29 ja MRC5 ja näistä valittiin kullekin virustyypille sopivin solulinja. Työssä testattiin Meridian Monoclonal Ab EV5 to Enterovirus, Meridian Monoclonal Ab to Enterovirus VP1 ja Dako 5-D8/1 Monoclonal Mouse Anti-Enterovirus pan-enterovirusvasta-aineita pikornavirusten tunnistamiseksi infektoiduista soluista. Työ tehtiin infektoimalla soluja ja fiksoimalla solut ennen vasta-ainevärjäystä. Kuvantamiseen käytettiin Turun yliopiston kuvantamiskeskuksen (Turku BioImaging) AxioVert 200M mikroskooppi.
Tulokset osoittivat, että Meridian EV5 ja VP1 vasta-aineiden tunnistusprofiili on laajempi kuin Dako vasta-aineen. Vasta-aine Meridian EV5 tunnisti coxsackievirus B1-5 -virustyyppejä, ja echovirus E-2,-12,-13,-16,-17,-20 -virustyyppejä. Meridian VP1 tunnisti samat virustyypit ja lisäksi coxsackievirus A13-virustyyppiä. Dako tunnisti edelleen coxsackievirus B1-5 virustyyppejä ja echovirus E-9,-12,-16 ja -17 virustyyppejä. Vasta-ainekokeiden aikana havaittiin että MRC5-soluilla käytetyt pikornavirusvasta-aineet Meridian EV5 ja Meridian VP1 antoivat mikroskoopilla vihreän taustan, minkä takia virukset ja vasta-aineet tarkistettiin A549- ja RD-soluilla. Työn tuloksia voidaan soveltuvin osin käyttää pikornavirusdiagnostiikassa esim. kehitettäessä antigeeninosoitustestiä.
Pikornavirukset (mm. entero- ja parechovirukset) ovat hyvin pieniä vaipattomia RNA-viruksia. Nämä virukset ovat yleisimpiä ihmisen taudinaiheuttajia. Turun Virusopin viruskokoelmista on valikoitu n. 50 pikornavirustyyppikantaa käsittäen entero- ja parechoviruksia, jotka infektoitiin valikoituihin solulinjoihin. Virusinfektiota seurattiin sytopaattisen vaikutuksen perusteella valomikroskoopilla. Infektoituvuuden perusteella sopivimmat virukset valittiin lisäykseen ja vasta-ainekokeisiin. Työssä testattiin useita kirjallisuudessa mainittuja solulinjoja kuten RD, A549, B-vero, HT29 ja MRC5 ja näistä valittiin kullekin virustyypille sopivin solulinja. Työssä testattiin Meridian Monoclonal Ab EV5 to Enterovirus, Meridian Monoclonal Ab to Enterovirus VP1 ja Dako 5-D8/1 Monoclonal Mouse Anti-Enterovirus pan-enterovirusvasta-aineita pikornavirusten tunnistamiseksi infektoiduista soluista. Työ tehtiin infektoimalla soluja ja fiksoimalla solut ennen vasta-ainevärjäystä. Kuvantamiseen käytettiin Turun yliopiston kuvantamiskeskuksen (Turku BioImaging) AxioVert 200M mikroskooppi.
Tulokset osoittivat, että Meridian EV5 ja VP1 vasta-aineiden tunnistusprofiili on laajempi kuin Dako vasta-aineen. Vasta-aine Meridian EV5 tunnisti coxsackievirus B1-5 -virustyyppejä, ja echovirus E-2,-12,-13,-16,-17,-20 -virustyyppejä. Meridian VP1 tunnisti samat virustyypit ja lisäksi coxsackievirus A13-virustyyppiä. Dako tunnisti edelleen coxsackievirus B1-5 virustyyppejä ja echovirus E-9,-12,-16 ja -17 virustyyppejä. Vasta-ainekokeiden aikana havaittiin että MRC5-soluilla käytetyt pikornavirusvasta-aineet Meridian EV5 ja Meridian VP1 antoivat mikroskoopilla vihreän taustan, minkä takia virukset ja vasta-aineet tarkistettiin A549- ja RD-soluilla. Työn tuloksia voidaan soveltuvin osin käyttää pikornavirusdiagnostiikassa esim. kehitettäessä antigeeninosoitustestiä.