γH2AX:n ja pilkottu kaspaasi-3:n immunohistokemiallisten värjäysten optimointi eturauhaskudoksessa
Maijala, Suvi; Weckström, Katarine (2013)
Maijala, Suvi
Weckström, Katarine
Metropolia Ammattikorkeakoulu
2013
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2013112818818
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2013112818818
Tiivistelmä
Suoritimme opinnäytetyömme Helsingin urologisessa biopankissa (HUB) Suomen molekyylilääketieteen instituutissa (FIMM). HUB on biopankkihanke, joka on samalla tutkimus- ja kehittämisprojekti. HUB:n tavoitteena on kehittää urologisten syöpien diagnostiikkaa ja hoitoa. Opinnäytetyömme liittyi tutkimus- ja kehittämishankkeeseen, jossa tarkoituksena on kehittää yksilöllistä lääkitystä eturauhassyövän hoitoon. Opinnäytetyössä optimoimme γH2AX:n (mittaa DNA-vauriota ja solukuolemaa) sekä pilkottu kaspaasi-3:n (mittaa solukuolemaa) vasta-ainepitoisuuksia kromogeenipohjaisille immunohistokemiallisille värjäysmenetelmille. Näiden vasta-aineiden avulla pystytään mittamaan sädetyksen ja lääkeaineiden vaikutusta eturauhaskudokseen. Eturauhassyöpä on miesten yleisin syöpä Suomessa. Eturauhassyövän hoitoon liittyy suuria haasteita, koska eturauhassyöpä voi vaihdella harmittomasta jopa tappavaan. Tutkimus- ja kehittämishankkeen mielenkiinnon kohteena on erityisesti eturauhassyövän muoto (kastraatioresistentti) johon, ei ole olemassa parantavia hoitoja. Optimoimme γH2AX ja pilkottu kaspaasi-3 -vasta-aineille manuaalivärjäyksen kahdelle eri kudoskuljettimelle sekä γH2AX:lle automaattivärjäyksen kahdelle eri kudoskuljettimelle. Optimoinnin perusteella jokaiselle γH2AX-värjäysmenetelmälle tuli erilainen vasta-ainepitoisuus ja pilkottu kaspaasi-3 -värjäysmenetelmille tuli molemmille sama vasta-ainepitoisuus. Optimoimamme vasta-ainepitoisuudet olivat paljon laimeammat kuin FIMM:ssä aiemmin käytetyissä menetelmissä. Tämän ansiosta immunohistokemiallisten värjäysten kustannukset pienenevät FIMM:ssä. Jatkossa on tarkoitus yhdistää γH2AX ja pilkottu kaspaasi-3 -vasta-aineet niin, että nämä kaksi vasta-ainetta voidaan tulkita samalta lasilta immunofluoresenssimenetelmällä.