Authentication of β-Carbonic Anhydrase Gene Silencing in Drosophila melanogaster
Niemelä, Henna (2012)
Niemelä, Henna
Tampereen ammattikorkeakoulu
2012
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2012121018913
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2012121018913
Tiivistelmä
Drosophila melanogaster on laajalti käytetty malliorganismi geneettisten sairauksien tutkimisessa, sillä useat ihmisen tautigeenit löytyvät tältä selkärangattomalta vastingeeneinä. Banaanikärpästä voidaan pitää eettisesti hyväksyttävänä mallieläimenä, jonka ylläpito on helppoa ja jälkeläismäärät suuria. Hiilihappoanhydraasit taas esiintyvät eri muodoissa eukaryooteissa ja prokaryooteissa. Nämä entsyymit osallistuvat organismin pH-tasapainon säätelyyn ja myös muihin tärkeisiin fysiologisiin prosesseihin. β-hiilihappoanhydraasia esiintyy pääasiassa selkärangattomissa ja kasveissa.
Opinnäytetyön tavoitteena oli eri D. melanogaster -kantoja risteyttämällä saada aikaan populaatio, jonka β-hiilihappoanhydraasi -geeni on mahdollista hiljentää lääkeruoan avulla. Tarkoituksena oli tutkia missä lääkeruokapitoisuudessa geeni hiljentyy, sekä etsiä ja pystyttää sopivia menetelmiä hiljentymisen todentamiseen.
RNA interferenssiä ja GAL4-UAS -menetelmää apuna käyttäen saatiin aikaan hiljennyksessä käytettävä jälkeläissukupolvi. Hiljentymistä tutkittiin geenin ekspression kautta kvantitatiivisella polymeraasiketjureaktiolla. Hiljentyminen pyrittiin myös osoittamaan proteiinitasolla western blot -menetelmällä ja histologisten värjäysten avulla pyrittiin toteamaan β-hiilihappoanhydraasin esiintyminen kudoksissa.
Viitteitä β-hiilihappoanhydraasi -geenin hiljentymisestä saatiin geenitasolla, joskin tulokset eivät olleet täysin johdonmukaisia. Immunoblottaus -menetelmästä saatujen tulosten mukaan käytetty vasta-aine ei toiminut täysin toivotusti. Histologisia värjäyksiä saatiin kehitettyä, joskin tuloksia hiljentymisestä on vaikea tulkita. Tutkimuksia jatketaan tutkimusryhmässä työssä pystytettyjä menetelmiä ja saatuja tuloksia apuna käyttäen. Tulevaisuudessa hiljentymistä voitaisiin tutkia eri kärpäslinjoilla ja suuremmalla näytemäärällä.
Opinnäytetyön tavoitteena oli eri D. melanogaster -kantoja risteyttämällä saada aikaan populaatio, jonka β-hiilihappoanhydraasi -geeni on mahdollista hiljentää lääkeruoan avulla. Tarkoituksena oli tutkia missä lääkeruokapitoisuudessa geeni hiljentyy, sekä etsiä ja pystyttää sopivia menetelmiä hiljentymisen todentamiseen.
RNA interferenssiä ja GAL4-UAS -menetelmää apuna käyttäen saatiin aikaan hiljennyksessä käytettävä jälkeläissukupolvi. Hiljentymistä tutkittiin geenin ekspression kautta kvantitatiivisella polymeraasiketjureaktiolla. Hiljentyminen pyrittiin myös osoittamaan proteiinitasolla western blot -menetelmällä ja histologisten värjäysten avulla pyrittiin toteamaan β-hiilihappoanhydraasin esiintyminen kudoksissa.
Viitteitä β-hiilihappoanhydraasi -geenin hiljentymisestä saatiin geenitasolla, joskin tulokset eivät olleet täysin johdonmukaisia. Immunoblottaus -menetelmästä saatujen tulosten mukaan käytetty vasta-aine ei toiminut täysin toivotusti. Histologisia värjäyksiä saatiin kehitettyä, joskin tuloksia hiljentymisestä on vaikea tulkita. Tutkimuksia jatketaan tutkimusryhmässä työssä pystytettyjä menetelmiä ja saatuja tuloksia apuna käyttäen. Tulevaisuudessa hiljentymistä voitaisiin tutkia eri kärpäslinjoilla ja suuremmalla näytemäärällä.