Influenssa A- ja B-virusten osoitukseen käytettävän SmartCycler RT-PCR-menetelmän validointi ja menetelmävertailu Actim Influenza A&B-vieritestiin

Abstract

Influenssavirusepidemioita ja -pandemioita esiintyy maailmanlaajuisesti säännöllisin väliajoin ja usein influenssavirukset aiheuttavat isännälleen voimakkaan hengitystieinfektion. Hoidon oikeellisuuden varmistamiseksi ja epidemioiden kontrolloinnin takaamiseksi on tärkeää kehittää nopeita ja luotettavia tapoja todeta influenssavirusten aiheuttamia infektioita.

Opinnäytetyömme tavoitteena on ollut sekä validoida influenssa A- ja B-viruksia tunnistava SmartCycler® RT-PCR-menetelmä että suorittaa menetelmävertailu tutkimamme menetelmän ja vieritestimenetelmän välillä. Toimeksiantajamme Yhtyneet Medix Laboratoriot Oy:n tavoitteena on käyttää kohdemenetelmällämme tehtäviä laboratoriotutkimuksia Actim Influenza A&B-vieritestin (Medix Biochemica) referenssinä.

Tutkimuksemme validointiosuudessa hyödynsimme Terveyden ja hyvinvoinnin laitokselta (THL) saatuja, PCR-menetelmällä tutkittuja näytteitä ja menetelmävertailu tehtiin tutkimalla vieritestauksen yhteydessä kerättyjä puskuriliuoksia, joista osa sisälsi influenssa A- ja B-viruksia. Kohdemenetelmämme validoinnin osoittauduttua onnistuneeksi käytimme tutkimaamme RT-PCR-menetelmää referenssimenetelmänä suhteessa Actim Influenza A&B-vieritestin immunokromatografiseen menetelmään.

SmartCycler® RT-PCR -menetelmällä saadut tulokset vastaavat säännönmukaisesti THL:n referenssimenetelmällä saatuja tuloksia, joten työmme validointiosuuden voidaan todeta onnistuneen. Lisäksi menetelmävertailussa todettiin useiden vieritestissä negatiivisiksi tulkittujen näytteiden osoittautuvan RT-PCR-menetelmällä positiivisiksi, mikä tukee ajatusta validoimamme menetelmän tarpeellisuudessa vieritestitulosten varmistamisessa. SmartCycler® RT-PCR -menetelmän voidaan todeta olevan käyttötarkoitukseensa sopiva, sillä validoinnissa tutkitut parametrit: kohdemenetelmän herkkyys, spesifisyys, lineaarisuus, toistettavuus ja luotettavuus, vastaavat hyvin toimeksiantajamme menetelmälle asettamia vaatimuksia.

Influenza epidemics and pandemics occur worldwide regularly. The influenza virus causes most often a severe respiratory infection in its host. To confirm the right treatment for the infected patients and to guarantee the control of the epidemics, it is important to develop rapid and reliable ways of diagnosing infections caused by influenza virus.

The purpose of our study was both to validate the real-time RT-PCR Smart Cycler®-analyzer in influenza A and B diagnostics and to perform a comparison between the validated method and a point-of-care test. The validated method is unique confirming its sample material, while our principal Yhtyneet Medix Laboratoriot Oy will utilize and market the diagnostic test as a reference method for the point-of-care test Actim® Influenza A&B.

In the validation part of our study, we used samples analyzed with a PCR method and gathered at the Finnish National Institute of Health and Welfare (THL). The method comparison was carried out on buffered samples collected during point-of-care testing. While the validation turned out to be successful, we used the validated RT-PCR method as a reference method regarding the immunochromatographic method in the Actim® Influenza A&B point-of-care test.

Our results showed that the SmartCycler® RT-PCR method corresponded regularly to the THL reference method, and therefore the validation part of our study can be considered successful. Moreover, in the method comparison we found a few samples that had been interpreted as negative for influenza in the point-of-care test to be positive with the RT-PCR method. This result supported the idea of using the studied and validated method as a reference for ensuring the results of the point-of-care test. The SmartCycler® is suitable for the intended use, while its high sensitivity, specificity, linearity, repeatability and reliability responded to the needs of Yhtyneet Medix Laboratoriot Oy.