Piristeiden toteaminen virtsasta ”Dilute and Shoot” LCQTOF -menetelmällä - menetelmänkehitys : Opinnäytetyö

Abstract

Opinnäytetyö tehtiin Yhtyneet Medix Laboratoriot Oy:ssä huume-, lääkeaine- ja dopingosastolla dopinganalyyttisiin tarkoituksiin.

Työn tavoitteena oli kehittää nestekromatografis-lentoaikamassaspektrometrinen (LCQTOF) ”Dilute and Shoot” -menetelmä humaanivirtsanäytteestä tehtävää piristeiden seulonta-analyysia varten. Menetelmäkehityksen tarkoituksena oli korvata laboratoriossa käytetty nykyinen piristeiden kaasukromatografinen (GC/NPD) seulontamenetelmä. Piristeet ovat dopingissa kiellettyjä kilpailutilanteissa, koska ne lisäävät vireystilaa ja vähentävät väsymyksen tunnetta keskushermoston kautta ja siten voivat parantaa urheilijan suorituskykyä.

Yhdisteiden erotus tapahtui nestekromatografisesti (LC) ja identifiointi perustuu korkean resoluution lentoaikamassaspektrometriseen analysointiin (TOF), jossa sähkösumutukseen (ESI) perustuva ionisaatio tehdään positiivisella polariteetilla.

Menetelmä validoitiin WADAn teknisten dokumenttien mukaan. Validoinnissa tutkittiin toistettavuutta, uusittavuutta, spesifisyyttä, matriisivaikutusta, säilyvyyttä ja mittausherkkyyttä.

Opinnäytetyön tuloksena kehitettiin toimiva seulontamenetelmä hyvin usealle yhdisteelle, joka otetaan käyttöön Yhtyneet Medix Laboratoriot Oy:n huume-, lääkeaine- ja dopingosastolla myöhemmin.

The study was made for United Medix Laboratories at the Drug-, Medicine- and Doping department for doping analysis.

The purpose was to develop a liquid chromatographic – time-of-flight mass spectrometric “Dilute and Shoot” method for determination of stimulants in human urine. The purpose of the method development was to replace the current gas chromatographic (GC/NPD) method used by the laboratory to screen stimulants. Stimulants increase an athlete’s vitality and decrease the feeling of tiredness, and are thus prohibited in competition.

Liquid chromatography (LC) was used to separate the compounds that were then identified using a high-resolution time-of-flight mass spectrometer TOF. The compounds were ionized using electrospray ionization (ESI).

The method was validated according to technical documents of WADA. Characteristics researched in the validation were repeatability (in-batch and inter-batch), specificity, matrix effects, the shelf life of the compounds and sensitivity of the measurements.

As result, the Laboratories obtained a working method for the analysis of many stimulants, which will be taken into use later at United Medix Laboratories Ltd., Drug-, Medicine- and Doping Department.