EphA3-reseptoriproteiinin ligandia sitovan osan tuotto eri isäntäorganismeissa sekä puhdistus ja karakterisointi
Päivänsäde, Eerika (2009)
Päivänsäde, Eerika
Turun ammattikorkeakoulu
2009
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-200908264176
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-200908264176
Tiivistelmä
Tämä opinnäytetyö tehtiin osa
Joint Biotechnology Laboratory:n Eph-reseptoriproteiinien ja efriiniligandien tutkimusprojektia. Opinnäytetyön tavoitteena oli tuottaa EphA3 reseptoriproteiinin ligandia sitovaa osaa kahdessa eri isäntäorganismissa Escherichia colissa ja Pichia pastoriksessa sekä puhdistaa tuotettu proteiini ja karakterisoida sen sitoutumisominaisuuksia eri efriiniligandien kanssa.
Proteiinin tuottamiseksi EhA3LBD:n geeni kloonattiin kahteen ekpressiovektoriin pET32a sekä pPIC9 ja transformoitiin tuottokantoihin (E. coli Origami B, P. pastoris GS115). Proteiinin puhdistus tehtiin talliaffiniteettikromatografian
avulla. Eri työvaiheiden tuloksia analysoitiin agaroosielektroforeesin ja SDS-PAGE menetelmien avulla.
Geenin kloonaus ja transformointi molempiin tuottokantoihin onnistui, mutta proteiinia tuotetettiin onnistuneesti ainoastaan Escherichia colin avulla. Onnistuneesti puhdistetun proteiinin avulla tutkittiin EphA3LBD sitoutuvuutta efriiniligandien A5, A3 ja B1 kanssa. Sitoutumiskokeen tulokseksi todettiin EphA3LBD reseptoriproteiinin sitoutuvan A3 ja B1 efriiniligandien kanssa.
Joint Biotechnology Laboratory:n Eph-reseptoriproteiinien ja efriiniligandien tutkimusprojektia. Opinnäytetyön tavoitteena oli tuottaa EphA3 reseptoriproteiinin ligandia sitovaa osaa kahdessa eri isäntäorganismissa Escherichia colissa ja Pichia pastoriksessa sekä puhdistaa tuotettu proteiini ja karakterisoida sen sitoutumisominaisuuksia eri efriiniligandien kanssa.
Proteiinin tuottamiseksi EhA3LBD:n geeni kloonattiin kahteen ekpressiovektoriin pET32a sekä pPIC9 ja transformoitiin tuottokantoihin (E. coli Origami B, P. pastoris GS115). Proteiinin puhdistus tehtiin talliaffiniteettikromatografian
avulla. Eri työvaiheiden tuloksia analysoitiin agaroosielektroforeesin ja SDS-PAGE menetelmien avulla.
Geenin kloonaus ja transformointi molempiin tuottokantoihin onnistui, mutta proteiinia tuotetettiin onnistuneesti ainoastaan Escherichia colin avulla. Onnistuneesti puhdistetun proteiinin avulla tutkittiin EphA3LBD sitoutuvuutta efriiniligandien A5, A3 ja B1 kanssa. Sitoutumiskokeen tulokseksi todettiin EphA3LBD reseptoriproteiinin sitoutuvan A3 ja B1 efriiniligandien kanssa.