Kokonaisen kudoksen kuvantaminen iDISCO-menetelmällä ja vertailu kudosleikkeisiin
Hakala, Mikko (2016)
Hakala, Mikko
Metropolia Ammattikorkeakoulu
2016
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2016112918223
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2016112918223
Tiivistelmä
Kudoksia on perinteisesti tutkittu valmistamalla ohuita kudosleikkeitä, jotka käsiteltyinä tai käsittelemättöminä on kuvannettu eri mikroskooppisin menetelmin. Näin saadut kaksiulotteiset kuvat ovat helppoja työstää, mutta kokonaiskäsitys esimerkiksi hermoratojen tarkasta rakenteesta ja sijainnista on jäänyt vaillinnaiseksi. Vaihtoehtona kudosleikkeiden valmistamiselle on kokonaisen kudoksen kirkastaminen, vasta-ainekäsittely sekä kuvantaminen.
Tässä opinnäytetyössä keskityttiin tutkimaan kokonaisen kudoksen kirkastamista, vasta-ainekäsittelyä, kuvantamista sekä tekniikkaan liittyviä etuja ja rajoituksia. Tutkimuseläiminä käytettiin hiiriä, joiden PPT-aivoalueelle injisoitiin AAV-CamKlla-hM3Dq-mCherry -virusta. Viruksessa olevan mCherry-väriaineen kulkeutumista aivoissa tutkittiin kirkastamalla kokonaiset aivot iDISCO-menetelmällä, jolloin valotasomikroskooppia käyttämällä saatiin rakennettua kolmiulotteinen malli aivoista sekä havaittua fluoresoivan proteiinin kulkeutuminen. Vertailun vuoksi valmistettiin perinteisiä kudosleikkeitä, joita verrattiin iDISCO-käsiteltyihin aivoihin.
Työ suoritettiin Helsingin yliopiston Farmakologian osastolla ja näytteet kuvattiin Saksan Bonnissa Deutsches Zentrum für Neurodegenerative Erkrankungen -instituutissa (DZNE).
Tässä opinnäytetyössä keskityttiin tutkimaan kokonaisen kudoksen kirkastamista, vasta-ainekäsittelyä, kuvantamista sekä tekniikkaan liittyviä etuja ja rajoituksia. Tutkimuseläiminä käytettiin hiiriä, joiden PPT-aivoalueelle injisoitiin AAV-CamKlla-hM3Dq-mCherry -virusta. Viruksessa olevan mCherry-väriaineen kulkeutumista aivoissa tutkittiin kirkastamalla kokonaiset aivot iDISCO-menetelmällä, jolloin valotasomikroskooppia käyttämällä saatiin rakennettua kolmiulotteinen malli aivoista sekä havaittua fluoresoivan proteiinin kulkeutuminen. Vertailun vuoksi valmistettiin perinteisiä kudosleikkeitä, joita verrattiin iDISCO-käsiteltyihin aivoihin.
Työ suoritettiin Helsingin yliopiston Farmakologian osastolla ja näytteet kuvattiin Saksan Bonnissa Deutsches Zentrum für Neurodegenerative Erkrankungen -instituutissa (DZNE).